l15培养基 (CCK-8)

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l15培养基 (CCK-8)2021年11月25日发(作者:上海化妆品批发网)

CCK8实验 1、在96孔板中配置100μl的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(7℃,5% CO2)。 2、向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。 、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。 4、向每孔加入10μl CCK8溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。 5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μl 0.1M的HCL溶液或者1% wv SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。 PS:1% wv SDS溶液配制方法: 组份浓度:10% (WV)SDS 配制量:100ml 配制方法: 1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中,加入约80ml的去离子水,68℃加入溶解 2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2 .将溶液定容至100ml后,室温保存。

注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 活力计算: 细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)][A(0加药)-A(空白)] ×100 A(加药):具有细胞、CCK8溶液和药物溶液的孔的吸光度 A(空白):具有培养基和CCK8溶液而没有细胞的孔的吸光度 A(0加药):具有细胞、CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力 CCK-8 可以用于细胞增殖和毒性分析。其基本原理为:该试剂中含有WST-8,它在电子载体(1-Methoxy PMS)的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄甲瓒染料,生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比,因此可以用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。 其使用方法在增殖和毒性试验中有所区别: 细胞增殖试验: 1.接种细胞悬液100微升于96孔板,预先置于7度,5%CO2饱和湿度的培养箱内培养

2.在每孔内加入10微升的CCK-8试剂. .把培养板放培养箱内1-4小时(根据细胞类型其时间有所不同) 4 在450nm波长处测定吸光值,参比波长为600nm或以上波长. 毒性分析试验: 1.接种100微升细胞悬液(5000个孔)于96孔板 2.预先放置7度5%CO2饱和湿度培养箱培养24小时 .加入10微升不同浓度的毒性物质到孔内培养基 4.在培养箱内培养48小时. 5.在每孔内加入10微升CCK-8试剂,在培养箱内培养1-4小时; 6在450nm波长处测定吸光值,参比波长为600nm或以上. 以上步骤摘自CCK-8的说明书,由于涉及到某些原因,我省去了上面的一些推销用语) (内有标价,1245元1000孔) 写在前面: 一直都像个新手,从未老道过。所有新手的迷茫与无奈我最能体会。看到园子里有一些同学在问有关CCK8试验的事情,当初我也和他们一样,像个被蜘蛛丝缠住头的迷茫苍蝇一头扎进园子里,期待能到些解决谜团的只言片语。希望我写的这些非专业文字能够帮助那些在实验室里没有前行者指点迷津的筒子们。当然仁者见仁智者见智,我

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发布时间:2021-11-25 00:17:44
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17条评论

  1. 在96孔板中配置100μl的细胞悬液

  2. 所有新手的迷茫与无奈我最能体会

  3. 1.接种100微升细胞悬液(5000个孔)于96孔板 2.预先放置7度5%CO2饱和湿度培养箱培养24小时 .加入10微升不同浓度的毒性物质到孔内培养基 4.在培养箱内培养48小时. 5.在每孔内加入10微升CCK-8试剂

  4. 深圳地铁11号线线路图-建筑工程管理2021年11月25日发(作者:上海化妆品批发网)CCK8实验 1

  5. 可在加CCK8之前更换新鲜培养基(除去培养基

  6. 其使用方法在增殖和毒性试验中有所区别

  7. 注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话

  8. 1.接种100微升细胞悬液(5000个孔)于96孔板 2.预先放置7度5%CO2饱和湿度培养箱培养24小时 .加入10微升不同浓度的毒性物质到孔内培养基 4.在培养箱内培养48小时. 5.在每孔内加入10微升CCK-8试剂

  9. PS:1% wv SDS溶液配制方法: 组份浓度:10% (WV)SDS 配制量:100ml 配制方法: 1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中

  10. CCK8溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力 CCK-8 可以用于细胞增殖和毒性分析

  11. 68℃加入溶解 2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2 .将溶液定容至100ml后